荧光显微镜和细胞成像

显微镜是了解组织结构、细胞结构和动力学以及分子功能的核心。 荧光显微镜通常用于确定有关细胞和组织的空间和拓扑信息。 精密的激光扫描显微仪器、超灵敏的数码相机和专门的荧光探针使实时观察分子水平的细胞事件成为可能。

使用中的荧光显微镜

荧光显微镜和细胞成像共享资源通过提供用于定量、多尺度和多模式荧光成像的最先进仪器和软件，推动癌症研究的卓越发展。

推进癌症研究卓越

神经元图像荧光显微镜和细胞成像共享资源可帮助基础研究人员和医生研究人员对样本进行成像并发表高知名度的文章，这些文章：

  • 阐明癌症、免疫、感染、代谢、神经和血管疾病的细胞和分子机制
  • 评估细胞和患者样本的治疗效果
  • 在基于细胞的检测中测试新的纳米技术
  • 定量测量组织形态学和病理学的变化

荧光显微镜和细胞成像共享资源为 UNM 研究人员提供了用于多种荧光和透射光显微镜技术的最先进仪器：

  • 激光扫描单光子和多光子显微镜以及高光谱成像系统可同时实现组织化学染色和荧光标记的可视化和量化
  • 全内反射荧光 (TIRF)、单粒子追踪 (SPT) 和单分子定位显微镜 (SMLM) 应用，以量化动态活细胞事件并实现低于光衍射极限的分辨率
  • 比率成像允许量化钙和其他离子浓度响应细胞信号的实时变化 

荧光显微镜和细胞成像共享资源的资源人员提供 调查员：

  • 实验设计和标本制备专家咨询 
  • 产品培训
  • 收费成像
  • 持续协助

Diane Lidke，博士； 教务主任

病理学系
第2325章 CRF203A
UNM综合癌症中心
新墨西哥州阿尔伯克基87131
电话：（505）272，8375

电子邮件 Diane Lidke 博士

迈克尔帕菲特博士； 技术总监

第2325章 CRF201A
UNM综合癌症中心
新墨西哥州阿尔伯克基87131
电话：505-272-1437

电子邮件帕菲特博士

Keith Lidke，博士； 特别顾问

210 耶鲁大道 NE, 2218
物理与天文交叉学科科学大楼
新墨西哥州阿尔伯克基87106
电话：（505）277，2616

电子邮件 Keith Lidke 博士

要确认使用此共享资源，请在您的出版物中包含以下内容：

这项研究得到了 UNM 综合癌症中心支持赠款 NCI P30CA118100 的部分支持，并利用了荧光显微镜和细胞成像共享资源。

出版后，请将您的重印之一或封面图片发送给我们以供我们记录。

控制系统

地点：CRF219

系统详细信息

  • 带有 Asylum 83D XYZ 压电扫描平台的定制奥林巴斯 IX3 倒置显微镜
  • Excelitas Turbo 多光谱 LED（宽视场）和卤素灯（明视场）  
  • 10X/0.3NA、20X/0.7NA 和 100X/1.4NA 油浸物镜
  • 奥林巴斯XM10单色CCD相机 
  • Asylum MFP Origin AFM 头具有用于生物制备的扩展行程
  • 用于 AFM 控制的 Asylum Research 软件
  • 用于光学显微镜控制的 Olympus cellSens 软件
  • 用于处理活细胞/组织的生物加热器
  • 提供培训探针，数量有限！
  • AFM 兼容培养皿：WillCo 盖底腔室 (Ted Pella cat # 14025-20) 和 BD Falcon (#351006) 聚苯乙烯培养皿
  • 可在 Ted Pella.com 上找到用于高分辨率扫描的原子级平面（云母或 HOPG）——请寻求帮助

可能的应用

  • 交替接触 (AC) 模式，又名轻拍模式，用于干式或湿式制备中的纳米级成像
  • 联系方式 用于干法或湿法制备中的机械力测量（弹性模量、附着力、压痕和力图） 

地点：CRF216

显微镜详情

  • 带 XY 电动载物台的 Leica DMi8 倒置显微镜
  • 金属卤化物荧光灯和卤素透射灯
  • 10X、20X 油、25X 水、63X 水 DIC 和 63X 油 DIC 物镜
  • PA-GFP、DAPI、CFP、YFP、FITC、罗丹明和 Cy5 样荧光团的激光激发
  • 可调谐和脉冲白光激光器：470 - 670 nm
  • 两个额外的激光器：405 nm 激光二极管和一个多氩（458、477、488、514 nm 线）
  • 六个探测器：2 个混合光谱探测器* (HyD)； 2 个光谱 SMD** HyD，1 个标准光谱 PMT 和 1 个传输 PMT（外部）
  • 振镜 Z 级
  • 共振扫描仪
  • Pico Harp 300 荧光寿命显微镜 (FLIM) 模块
  • LASX 采集软件
  • SymphoTime64 (PicoQuant) FLIM 软件
  • 惠更斯解卷积软件
  • 用于活细胞成像的 Tokai Hit Stage 顶级培养箱

* HyD 是使用 GAsP 光电阴极和雪崩光电二极管的专用探测器

**单分子探测器 (SMD)

可能的应用

  • 用 #1.5 盖玻片固定在标准载玻片上的标本
  • 活细胞标本（LabTekII #1.5 多孔或 35 mm (#1.5) 盖底）
  • FLIM FRET（固定或活细胞）
  • FRET 受体漂白（固定）
  • FRET 敏化发射（活细胞）
  • FRAP（活细胞）
  • 3D 采集（Z-Stacks）和延时成像
  • 多光谱分离
  • 大面积、多维瓷砖扫描
  • 通过图像恢复处理的超分辨率（~130nm）

地点：CRF226

显微镜详情

  • 带 XY 电动载物台的蔡司 AxioObserver 倒置显微镜
  • 金卤灯和卤素透射灯
  • 10x、20x、40x 油、63x 油和 63x 水浸物镜
  • DIC 可提供 10x、20x、40x 和 63x 物镜
  • PA-GFP、DAPI、CFP、YFP、FITC、罗丹明和 Cy5 样荧光团的激光激发
  • 四种固态激光器：405 nm、488 nm、561 nm、640 nm
  • 通道和光谱检测 - GaAsP PMT 检测器
  • 通道模式下可同时检测 3 个通道
  • Airyscan 阵列检测器可将 XY 分辨率提高 1.7 倍
  • 透射光检测器
  • 活细胞孵化系统：温度、湿度和二氧化碳控制
  • Zen Blue图像采集软件

可能的应用

  • 用 #1.5 盖玻片固定在标准载玻片上的标本
  • 活细胞标本（LabTekII #1.5 多孔或 35 mm (#1.5) 盖底）
  • FRET 受体漂白（固定）
  • FRET 敏化发射（活细胞）
  • FRAP（活细胞）
  • 3D 采集（Z-Stacks）和延时成像
  • 多光谱分离
  • 大面积、多维瓷砖扫描
  • 通过图像恢复处理的超分辨率（~130nm）

地点：CRF226

显微镜详情

  • 定制的奥林巴斯 IX83 倒置显微镜，带 ASI 电动 XY 载物台，带压电 Z 插件。
  • Excelitas Turbo 多光谱 LED（宽场）和 Lumencor 白光 LED（明场）  
  • 20x/0.8NA 油、60x/1.5NA 油 TIRF、60x/1.2NA 水和 100x/1.4NA 油物镜
  • DIC 能够用于 60x 和 100x 光学器件。
  • 奥林巴斯实时控制器，用于时间精确的相机和激励同步
  • 4 激光线 MITICO TIRF 照明器，用于独立的渗透深度
  • 4 条独立的 TIRF 激光线：405nm (100mW)； 488nm (100mW)； 561nm (100mW) 和 640nm (140mW)
  • 可直接随机光学重建显微镜 (dSTORM)、光激活定位显微镜 (PALM) 和高度倾斜层流光学 (HILO) 片材成像
  • Hamamatsu Fusion sCMOS 相机和 Geminini W-View 图像分离器，用于 2 色同步活细胞采集。
  • 非光破坏性 IR ZDC2 自动对焦，可实现极快的单次拍摄或连续自动对焦功能 
  • BiopTechs 用于短期活细胞应用的客观加热器
  • 奥林巴斯 cellSens Dimension 图像采集软件

可能的应用

  • 用 #1.5H 盖玻片固定样品
  • 活细胞标本（LabTekII #1.5H 多孔或 35 mm (#1.5H) 盖底）
  • 3D 采集（Z-Stacks）和延时成像
  • 具体应用包括活细胞 TIRF 单分子检测、HILO、2D dSTORM 或 PALM 
  • 惠更斯定位器提供的支持 GPU 的后处理

相机位置：CRF218

显微镜详情

  • 倒置奥林巴斯IX-71倒置显微镜
  • 汞荧光灯和卤素透射灯
  • 单色仪 – 350nm-670nm 激发范围
  • 激光器：405nm、488nm、520nm和642nm
  • 20x、60x H2O、100x 油、150x 油 TIRF 物镜
  • 用于量子点、DAPI、FITC 和类 Rhod 荧光团、Fura-2、Indo-1 的荧光滤光片
  • Andor IQ 图像采集软件
  • 客观加热器和病理学设备活细胞培养系统，含二氧化碳、热量、湿度
  • XYZ电动载物台
  • 安道尔 iXon EM-CCD 相机
  • Opti-split（双）图像分割器

可能的应用

  • 固定样品安装在载玻片上
  • 使用物镜加温器进行活细胞成像
  • 单粒子追踪
  • 全内反射荧光 (TIRF)
  • 比率计量成像（双激发/单发射或单激发双发射）
  • 培养中的活细胞
  • 宽场荧光 – 单色器可实现多种荧光团
  • Z 堆栈和时间序列

相机位置：CRF212

显微镜详情 

  • 蔡司 AxioObserver 倒置荧光显微镜
  • Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS 单色相机（100fps，全分辨率 2048x2048）
  • 金卤灯和卤素透射灯
  • 10x、20x、63xDIC 油和 100x 油物镜
  • 10 倍和 20 倍物镜的相差
  • 荧光滤光片组包括：DAPI、FITC、罗丹明/TRITC/Cy3、德克萨斯红和 Cy5
  • DIC 可用于 63x 物镜
  • 物镜加热器（63x 水镜） o 用于 Z 形堆叠的电动物镜转换器
  • 用于多位置图像采集的电动 XY 载物台（固定或活细胞延时成像）
  • SlideBook6 图像采集软件

可能的应用 

  • 固定样品安装在载玻片上
  • 盖玻片中的活细胞/用目标加热器加热
  • DIC（非共焦）具有 63x 物镜，与荧光合并或单独使用
  • Z 堆栈、蒙太奇和时间序列成像

位于 CRF224 和 CRF226

软件

  • 惠更斯反卷积科学体积成像 (1)
  • 幻灯片 (1)
  • 立体调查员 (1)
  • 神经萤火虫 (1)
  • LASX（徕卡共焦） (1)
  • IQTL（台风扫描仪分析）(1)
  • 禅（2）  
  • LSM510 (2)
  • Nuance 光谱成像软件 (2)

分析选项

  • 协同定位
  • 去卷积
  • 光谱分离
  • 强度分析
  • 形态分析
  • 3D渲染
  • 对象计数
  • 粒子追踪
  • 出版准备

位于 CRF214

Typhoon FLA 7000 是一款快速、多功能的激光扫描仪，适用于生物分子成像应用，包括：

  • 放射性同位素标记的灵敏和定量测量
  • 化学荧光蛋白质印迹
  • 单一荧光（可见激发）
  • 比色染色记录（例如，考马斯蓝和银染凝胶）

位于 CRF214

Li-Cor Odessey Fc 是一种近红外扫描仪（680nm 和 740nm），适用于生物分子成像应用，包括：

  • 化学发光蛋白质印迹的灵敏和定量测量
  • 比色染色记录（例如，考马斯蓝和银染凝胶）

显微镜服务包括

  • 实验设计和标本制备专家咨询
  • 用户培训
  • 操作员辅助成像和获取赠款申请的初步数据
  • 年度开放日向用户通报新仪器、技术和应用的更新
  • 为研究生和研究员开设的光学和仪器功能显微镜课程
  • 为新用户提供样本制备方面的实践培训的年度研讨会

FasLGFP 静息收购_20201113_165
RBL 细胞中基础 FasL-GFP 活性表达的全内反射荧光 (TIRF) 显微镜检查

显微镜服务和费率

Zeiss AxioObserver – Hamamatsu ORCA Flash4.0v2 sCMOS 单色相机：7 美元/小时

徕卡 TCS-SP8/FLIM: $55/小时

蔡司LSM800: $51/小时

Olympus IX71 单粒子追踪/比率显微镜（Rm. 218）：25 美元/小时

奥林巴斯 IX83 TIRF/dSTORM 显微镜（Rm. 226）：30 美元/小时

Asylum Research AFM MFP3D BIO (Rm.219): $48/小时

所有仪器培训、操作员成像和分析培训：150 美元/小时

  • 共聚焦（4小时）
  • 高级广角（2-3 小时）
  • 原子力显微镜（4-8 小时）
  • 基本广角（0.5-1小时）
  • 操作员成像和分析培训（取决于项目）

设施资金

新墨西哥大学和癌症中心荧光显微镜共享资源承认自 1999 年开放以来仪器购买或设施支持的以下资金。

当前资金

NCI 2P30 CA118100 (PI Willman, C.) “UNM 癌症中心支持补助金” 9/25/05-8/31/20

NIGMS 5P50 GM085273（PI Wilson，BS）“细胞信号网络 (STMC) 时空建模中心” 08/01/08-07/31/19

STMC P50GM085273：对徕卡 TCS-SP8 和奥林巴斯 iX71 的资金支持

过去的仪器资金

NCRR 1 S10 RR14668 (PI Wandinger-Ness, A.) “用于健康科学研究的蔡司 LSM510 共聚焦显微镜” 04/01/00-03/31/01

NSF MCB9982161 (PI Wandinger-Ness, A.)“晚期内吞作用中的 Rab7 和辅助蛋白功能”（购买用于活细胞成像的滨松数码相机）04/01/00-03/31/06

NCRR S10 RR016918（PI Wdinger-Ness, A.）“用于活细胞成像项目的蔡司 Axiovert 200” 08/01/02-04/01/04

NCRR S10 RR19287 (PI Wanderinger-Ness, A.) “META 探测器和 405 nm 激光器” 04/01/04-03/31/05

NCRR 1S10RR025540 (PI Wandinger-Ness, A., co-I Lee, R.) “UNM 荧光显微镜核心的共聚焦体视显微镜” ARRA 05/01/09-03/31/10

NSF DGE-0549500（PI Osinski, M. co-I, Oliver Co-PI）“细胞生物学和神经科学纳米技术”（Olympus IX71 配件采购）6/15/06-5/31/11

马修斯家族基金 (PI Lee, R.) “Nuance 光谱成像系统，Cri” 01/01/09-12/31/-09

NIDDK 3R301 DK050141 (PI Wdinger-Ness, A.)“多囊肾病的病理机制”购买蔡司 Axio Observer 510 META) ARRA 行政补充 09/30/09-09/29/11

NCRR P20 RR11830（PI Oliver, J., co-PI Eaton, P.）“加强新墨西哥州的多学科研究” 9/30/96 ‑ 9/29/99

NCI R24 CA88339 (PI Sklar, L.) “UNM 癌症研究的共享资源” 07/01/00-06/30/05

NCI P20 CA88807（PI Willman, C.）“新墨西哥大学癌症中心规划补助金”07/01/00-06/30/05

1999 年至今的校内资金：437,266 美元

新墨西哥大学健康科学中心

新墨西哥大学癌症中心

新墨西哥大学医学院病理学系